一：CHO重組表達(dá)上市申報(bào)前為什么要關(guān)注遺傳穩(wěn)定性？

CHO細(xì)胞因?yàn)槠涮厥獾男阅苷紦?jù)生物治療性重組蛋白質(zhì)應(yīng)用方面的全球市場(chǎng)89%。CHO細(xì)胞能夠適應(yīng)無(wú)血清培養(yǎng)基的條件，可以懸浮培養(yǎng)利于生產(chǎn)放大；同時(shí)CHO細(xì)胞是可進(jìn)行基因操作的，容易得到高產(chǎn)的單克隆細(xì)胞株，也可以進(jìn)行類似的翻譯后修飾。尤其值得注意的是，CHO細(xì)胞對(duì)于人類病毒的敏感性較低，非常利于生物制藥的應(yīng)用。但CHO的基因可塑性同樣會(huì)表現(xiàn)為細(xì)胞的遺傳不穩(wěn)定性，如基因的重排、目的基因的突變、表觀遺傳學(xué)的基因沉默、以及基因擴(kuò)增系統(tǒng)的多拷貝表達(dá)壓力等。為了藥品生產(chǎn)的持續(xù)穩(wěn)定，監(jiān)管機(jī)構(gòu)對(duì)于CHO細(xì)胞的表型穩(wěn)定性與遺傳穩(wěn)定性均提出了相應(yīng)要求。

二：中美法規(guī)或指南對(duì)于遺傳穩(wěn)定性(CHO重組表達(dá))是如何規(guī)定的？

三：遺傳穩(wěn)定性考察的項(xiàng)目有哪些？

四：生產(chǎn)穩(wěn)定性考察內(nèi)容與接受標(biāo)準(zhǔn)

生產(chǎn)穩(wěn)定性的考察會(huì)體現(xiàn)在表型穩(wěn)定性、產(chǎn)量穩(wěn)定性、質(zhì)量穩(wěn)定性與遺傳穩(wěn)定性等4個(gè)方面，隨著CHO的代次不斷增加，其生產(chǎn)表型以及產(chǎn)量會(huì)發(fā)生一定程度的變化，一般要求產(chǎn)量下降超過(guò)30%作為限定代次。

根據(jù)現(xiàn)行法規(guī)與指南要求，要求對(duì)目的基因序列、基因拷貝數(shù)、整合位點(diǎn)分析、側(cè)翼序列分析以及表達(dá)載體的突變或缺失分析，其中歐美對(duì)目的基因的RNA水平確認(rèn)有要求，同時(shí)關(guān)于染色體數(shù)目與結(jié)構(gòu)方面推薦為可選項(xiàng)目。