一、薄層層析技術(shù)概述

薄層層析(Thin Layer Chromatography, TLC)是一種簡單、快速、經(jīng)濟的分離分析技術(shù)，廣泛應(yīng)用于有機合成、藥物分析、食品檢測等領(lǐng)域。硅膠板作為最常用的薄層色譜固定相，具有分離效果好、操作簡便等優(yōu)點。本說明將詳細(xì)介紹硅膠板的正確使用方法。

二、硅膠板的選擇

1.?硅膠板厚度選擇：?

l?常規(guī)分析：0.20-0.25mm厚度最為常用，適用于大多數(shù)分離需求。

l?制備型分離：0.5-2.0mm厚度，可承載更多樣品量。

l?高效薄層(HPTLC)：0.10-0.15mm厚度，分離效率更高。??

2.?硅膠類型選擇：

l?硅膠G：含有石膏粘合劑，機械強度較好。

l?硅膠H：不含粘合劑，適用于某些特殊分離。?

l?硅膠GF254：含有熒光指示劑，在254nm紫外光下顯示熒光淬滅,適用于某些特殊分離。

l?硅膠HF254：不含粘合劑,含有熒光指示劑，在254nm紫外光下顯示熒光淬滅 。?

三、樣品準(zhǔn)備與上樣

1.?樣品溶解:

u?使用揮發(fā)性有機溶劑(如甲醇、乙醇、二氯甲烷等)溶解樣品；

u?樣品濃度建議在0.5-5mg/mL范圍內(nèi)；

u?確保樣品完全溶解，避免固體顆粒堵塞毛細(xì)管 。??

2.?點樣工具選擇：

u?微量注射器：精確控制上樣量，適用于定量分析。

u?毛細(xì)管：操作簡便，適用于快速定性分析。?

u?自動點樣器：用于高通量或精確重復(fù)實驗。

3.?上樣操作要點：

u?點樣位置：距薄層板底邊1-1.5cm處。?

u?點樣直徑：控制在2-3mm以內(nèi)，多次點樣時需等待前次溶劑揮發(fā)完全。

u?點樣間距：相鄰樣品點間距不小于0.5cm。

u?標(biāo)記起始線：用鉛筆輕劃標(biāo)記，避免使用油性筆。?

4.?上樣量控制:

u?常規(guī)分析：1-5μL(約0.5-10μg物質(zhì))。

u?制備型TLC：10-100μL(根據(jù)板厚度調(diào)整)。?

u?檢測限要求高：可適當(dāng)增加上樣量，但需注意斑點擴散。??

四、?展開系統(tǒng)選擇與展開操作

1.?展開劑選擇原則:?

ü?根據(jù)樣品極性選擇合適比例的展開劑。

ü?常用展開劑體系：石油醚/乙酸乙酯、二氯甲烷/甲醇等。?

ü?可參考文獻(xiàn)或通過預(yù)實驗優(yōu)化比例。???

2.?展開操作步驟：

ü?將適量展開劑倒入展開缸，液層高度約0.5cm；?

ü?密閉展開缸，使缸內(nèi)蒸汽飽和10-15分鐘；

ü?將點樣后的薄層板垂直放入展開缸；

ü?展開劑前沿上升至距頂端0.5-1cm時取出；

ü?立即用鉛筆標(biāo)記溶劑前沿位置 ；??

3.?展開方式選擇:

ü?上行展開：最常用，適用于大多數(shù)情況。?

ü?下行展開：適用于Rf值較小的組分。

ü?雙向展開：復(fù)雜混合物分離。?

ü?多次展開：提高分離度。?

4.?展開注意事項：

ü?展開缸需保持水平放置。

ü?避免展開過程中振動或移動展開缸。

ü?環(huán)境溫度變化可能影響分離效果。?

ü?展開過程應(yīng)在通風(fēng)櫥中進行。???

五、顯色與結(jié)果分析

1.?顯色方法：?

??紫外燈觀察：適用于有紫外吸收或熒光物質(zhì)。

??碘蒸氣顯色：通用方法，多數(shù)有機物可顯色。

??顯色劑噴霧：如茚三酮(氨基酸)、硫酸乙醇溶液(通用)等。?

??生物自顯影：適用于抗生素等生物活性物質(zhì)。???

2.?Rf值計算 Rf = 斑點中心移動距離 / 溶劑前沿移動距離 。

3.?結(jié)果記錄:?

??拍照記錄(普通光和紫外光)。?

??標(biāo)注各斑點Rf值。

??記錄展開劑組成和顯色方法。?

六、常見問題與解決方案

1.?斑點拖尾 可能原因：

樣品過載 ?

硅膠板活性不合適

展開劑選擇不當(dāng)

解決方案：

減少上樣量

活化或減活硅膠板

調(diào)整展開劑極性或添加改性劑(如酸、堿) ??

2.?斑點擴散 可能原因：

點樣量過大

點樣溶劑選擇不當(dāng) ?

點樣速度過快

解決方案：

減少上樣量

改用低沸點溶劑

分次點樣，等待溶劑揮發(fā) ??

3.?分離效果差 可能原因：

展開劑選擇不當(dāng)

展開缸未飽和

環(huán)境溫度波動

解決方案：

優(yōu)化展開劑比例

延長展開缸飽和時間

控制實驗環(huán)境溫度 ??

七、安全注意事項

1.??操作有機溶劑時應(yīng)在通風(fēng)櫥中進行 ?

2.??避免直接接觸顯色劑，必要時佩戴防護手套 ?

3.??紫外燈觀察時保護眼睛，避免直視紫外光源 ?

4.??廢棄硅膠板應(yīng)按化學(xué)廢棄物處理 ?

5. ?保持工作區(qū)域整潔，避免溶劑揮發(fā)積聚 ??

八、硅膠板保存

1.??未使用的硅膠板應(yīng)密封保存于干燥器中 ?

2.??使用前可根據(jù)需要在105℃活化30分鐘 ?

3.??點樣后的硅膠板應(yīng)及時展開，避免長時間放置 ?

4.??展開后的硅膠板可拍照存檔后妥善處理 ??

正確使用薄層層析硅膠板能夠獲得良好的分離效果，為后續(xù)分析提供可靠依據(jù)。實驗者應(yīng)根據(jù)具體樣品性質(zhì)和實驗?zāi)康膬?yōu)化各項參數(shù)，積累經(jīng)驗以獲得最佳分離效果。

青島海粟新材料科技有限公司，可以滿足從小試到中試以放大生產(chǎn)的一系列硅膠填料，以及各種功能化硅膠（改性硅膠吸附劑），專門用于定向吸附，從而滿足客戶的使用需求。同時也提供檢測用到的硅膠系列耗材產(chǎn)品（TLC薄層板等）。

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