2024年1月31日，F(xiàn)DA正式發(fā)布 “Considerations for the Development of Chimeric Antigen Receptor (CAR) T Cell Products”，為CAR-T細胞產(chǎn)品的開發(fā)提供了化學、制造和控制（CMC）、藥理學和毒理學以及腫瘤適應癥（包括血液系統(tǒng)惡性腫瘤和實體瘤）臨床研究設計的相關建議。

CAR-T 細胞制造涉及多種生物物料和復雜的多步驟程序，這些因素都是產(chǎn)品批間差異的潛在來源。因此，生產(chǎn)過程的控制以及適當?shù)闹虚g和批次放行檢測對于確保 CAR-T 細胞的安全性、質(zhì)量和批間一致性至關重要。本期我們聚焦FDA最新版指南，深度解讀CAR-T 細胞產(chǎn)品CMC階段的五大注意事項！

為了促進CAR-T細胞批次間的一致性，F(xiàn)DA建議對生產(chǎn)工藝進行良好控制，可以通過使用優(yōu)質(zhì)材料、CPP的過程中控制、過程中測試以及CQA中間體和最終產(chǎn)品的測試來實現(xiàn)。FDA建議人類或動物源性成分進行適當?shù)耐庠葱詸z測。

在當前良好生產(chǎn)規(guī)范（CGMP）條件下，應使用經(jīng)驗證的無菌工藝進行生產(chǎn)。IND應證明通過開發(fā)或工藝批次生產(chǎn)，按照擬定的制造工藝生產(chǎn)CAR-T細胞的能力，進一步支持產(chǎn)品安全性。一般來說，來自健康捐贈者的起始材料適用于生產(chǎn)工藝開發(fā)批次；當使用患者來源的起始材料時，可能建議對自體CAR-T細胞進行額外的生產(chǎn)工藝開發(fā)。CAR T細胞的過程中測試方案通常評估多個參數(shù)（例如，活力、細胞數(shù)量、細胞表型、CAR表達）。FDA建議對CAR T細胞進行穩(wěn)定性研究，以支持2020年1月指南“GT CMC指南V.A.7和V.B.8”中所述的保持和儲存時間。另外，生產(chǎn)設備的運行參數(shù)應驗證以支持BLA。

CAR-T細胞分析檢測

對CAR-T細胞的分析檢測，目的在于確保產(chǎn)品的安全性、特性、質(zhì)量、純度和強度（包括效力）。在2020年1月指南“GT CMC指南V.A.4和V.B.5”提供了Drug Substance (DS)和Drug Product (DP)分析測試的一般建議。V.A.4.b.i包括藥典測試替代方法的建議。V.A.5.b.i包括對新鮮制備細胞產(chǎn)品的建議，或在最終配方和患者給藥之間有限保持時間內(nèi)使用的細胞產(chǎn)品的建議。

 CAR-T細胞的標簽

IND產(chǎn)品必須貼上標簽，并注明“警告：新藥——受美國法律限制用于研究用途”。FDA建議標簽包括產(chǎn)品名稱、制造商信息以及“請勿過濾”和“請勿輻照”警告。用自體起始材料制造的CAR-T細胞必須貼上“僅供自體使用”的標簽。根據(jù)對自體起始材料進行的供體檢測和篩查，自體CAR-T細胞的標簽必須注明“未評估感染性物質(zhì)”，除非已根據(jù)21 CFR 1271.75、21 CFR 1271.80和21 CFR 1271.85（21 CFR 1271.90(c)(2)）進行了所有其他適用的篩查和檢測。如果進行的篩查或測試結(jié)果表明存在相關傳染病病原體和/或相關風險因素或臨床證據(jù)，則CAR T細胞也必須貼上21 CFR 1271.3(h)中所示的生物危害圖例。如果CAR-T細胞表達多個轉(zhuǎn)基因元件，則效價測定應測量每個功能元件的活性。

▉ CAR-T細胞產(chǎn)品生命周期內(nèi)生產(chǎn)變更管理和可比性評估

CAR-T細胞產(chǎn)品生命周期中的變化，包括最終容器、培養(yǎng)過程中使用的細胞因子或細胞擴增持續(xù)時間的變化，都可能會影響產(chǎn)品質(zhì)量、安全性、功效或穩(wěn)定性，F(xiàn)DA建議申請人在考慮此類變更時與OTAT溝通。

在規(guī)劃此類變更時，一般建議申請人考慮以下事項：

1）載體生產(chǎn)過程的重大變化（例如，從貼壁培養(yǎng)到懸浮培養(yǎng)）應得到可比性研究的支持，評估此類變更對載體和CAR-T細胞的影響，應包括對變化前后載體的并行分析。

2）對于培養(yǎng)基中生長因子或添加物濃度或類型的變化，應進行更穩(wěn)健的可比性研究。

3）當CAR-T細胞或載體生產(chǎn)設施發(fā)生變化時，應建立生產(chǎn)設施之間的可比性。

變更管理

關鍵實施及產(chǎn)品開發(fā)階段變更，應進行風險評估，該風險評估應告知是否需要進行分析性可比性研究。FDA建議在啟動可比性研究或?qū)嵤┳兏?，將擬議變更的細節(jié)、伴隨的風險評估和擬議變更管理策略作為修訂提交到IND，建議申請人與OTAT討論研究設計和驗收標準。可根據(jù)ICH Q5E中描述的一般原則，評估CAR-T細胞變化前后的分析可比性。

如果沒有足夠的證據(jù)證明分析的可比性，則可能需要進行新的非臨床或臨床研究，這可能會推遲產(chǎn)品批準。如果開發(fā)后期變更，且沒有支持BLA的額外臨床研究計劃，則分析可比性研究應與批準產(chǎn)品進行的研究一樣全面和徹底。

可比性研究設計

FDA建議，擬議的分析方法適用于檢測變更對產(chǎn)品安全性和有效性的潛在影響。用擬議變更生產(chǎn)的產(chǎn)品能滿足當前放行標準的證明通常不足以建立可比性。應使用適當?shù)慕y(tǒng)計方法和預定義的驗收標準進行分析。進行批次放行測試的屬性外，還應使用可靠的分析方法監(jiān)測各種產(chǎn)品屬性，包括細胞表面標記。

由于自體CAR-T細胞的細胞起始材料固有的變異性，使用歷史批次來評估可比性可能不夠。FDA建議盡可能使用相同的細胞起始材料，通過并行測試來評估CAR-T細胞的可比性。如使用來自健康供體的CAR T細胞進行可比性研究，當健康供體生產(chǎn)的產(chǎn)品不足以評估自體CAR-T細胞的產(chǎn)品可比性，可比性研究還應包括對由患者細胞起始材料生產(chǎn)的CAR T細胞的評估。

▉ 單中心或多中心生產(chǎn)

單點生產(chǎn)

收集細胞起始材料，并將其運送集中生產(chǎn)點生產(chǎn)CAR T細胞。CAR-T細胞隨后被運送到本地或遠程臨床地點進行給藥。單點生產(chǎn)可能降低因設施之間差異而產(chǎn)生的產(chǎn)品可變性。

多中心生產(chǎn)

多中心生產(chǎn)可以縮短從細胞起始材料收集到自體產(chǎn)品給藥時間；然而，制造設施之間差異可能會導致產(chǎn)品可變性，申請人應該證明在每個中心生產(chǎn)的產(chǎn)品有可比性，以支持臨床試驗結(jié)果分析。FDA建議在可能的情況下，在整個生產(chǎn)設施中使用相同的標準操作程序（SOP）、培訓、試劑和設備，還建議IND描述各生產(chǎn)場所制造過程中的任何差異。FDA建議提交數(shù)據(jù)，最好是來自使用相同細胞起始材料在每個中心進行鑒定，以證明每個中心生產(chǎn)的產(chǎn)品的分析可比性，包括用于測試的方法列表和用于確定分析可比性的預定義驗收標準。

多中心測試

FDA建議使用分析轉(zhuǎn)移方案以確保在每個測試點進行的非藥典試驗適用于預期目的，并且在所有測試間可重復, 例如，流式細胞術。FDA建議在可能的情況下，在測試點中使用相同的SOP、試劑和設備。